Отработка условий хроматографического разделения рифампицина методом ВЭЖХ
Вы здесь
Приведены результаты исследований по определению оптимальных условий для идентификации и хроматографического разделения рифампицина методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии. В ходе экспериментальных исследований по выбору разделительной колонки выбрана колонка с обращенно-фазным сорбентом С18 длиной 150 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм и размером частиц 5 мкм. В качестве подвижной фазы для элюирования антибиотика выбрана смесь воды и метанола в объемном соотношении 30:70 в изократическом режиме со скоростью потока 0,5 мл/мин. В подобранных условиях проведения анализа время удерживания антибиотика составило 4,8 минуты. В ходе исследований по выбору оптимальной длины волны выбрана λ=250 нм в ультрафиолетовом диапазоне спектра. Экспериментальные обоснованные параметры будут использованы в исследованиях для разработки способа извлечения рифампицина в пищевых продуктах животного происхождения и разработки методики количественного определения рифампицина в пищевых продуктах животного происхождения.
Комментарии - 8
Уважаемые коллеги, доброе утро!
Антибиотик рифампицин применяется в ветеринарии. Возникает вопрос: в процессе исследований отработаны оптимальные условия хроматографического разделения рифампицина с какими антибиотиками или другими химическими соединениями?
Добрый день, Татьяна Валентиновна, спасибо за вопрос. Проведенные нами исследования по разделению рифампицина методом ВЭЖХ/УФ будут использоваться для дальнейших экспериментов по отработке способов извлечения рифампицина из пищевых продуктов (молоко, мясо, печень, почки), включающую выбор оптимального варианта, который обеспечивает максимальную степень экстракции аналита и его очистку от матричных компонентов, с целью предотвращения загрязнения масс-спектрометрического детектора.
Следующий этап по разработке методики – определение остаточного количества рифампицина в присутствии любых других классов антибиотиков будет проводиться методом ВЭЖХ/МС, обеспечивающим практически 100% селективность анализа рифампицина.
Мария Олеговна, добрый день, ответьте на несколько вопросов по Вашему докладу:
1.На сегодняшний день сельское хозяйство является лидером по использованию антибиотиков (как в количественном, так и в качественном отношении). Почему Вы выбрали именно рифампицин?
2.В каких продуктах животноводства планируется определять рифампицин (молочная, мясо, субпродукты)? Или методика будет универсальная?
Добрый день, Марина Владимировна, спасибо за вопросы!
1) Выбрали именно рифампицин, так как методик количественного определения данного антибиотика в пищевых продуктах (молоко, мясо, субпродукты) в методической базе РФ отсутствуют.
2) Основное внимание будет уделено разработке методики определения остаточного количества в молоке. Как правило, пробоподготовка различных категорий пищевых продуктов зависит от матрицы.
Здравствуйте, Мария Олеговна! Какие ещё используются методы определения остаточного количества рифампицина в пищевых продуктах на сегодняшний день?
Здравствуйте, Всеволод Алексеевич, спасибо за вопрос! В научной литературе содержатся данные об определении рифампицина в пищевых продуктах такими методами, как МС МАЛДИ (масс-спектрометрия с матрично-активированной лазерной диссоциацией/ионизацией в сочетаии с времяпролетных масс-анализатором) и иммунохроматографическая тест-система.
Глубокоуважаемая Мария Олеговна! Почему Вами в качестве окончательного варианта подвижной фазы для элюирования выбрано соотношение метанола к воде как 70:30, хотя подвижная фаза компонентов в сочетании 1:1 Вами была изучена и более безопасна? Почему максимальная чувствительность детектора Вами принята равной 250 нм, тогда как приведенная Вами спектрограмма показывает соответствие максимального пика длине волны 235 нм? Спасибо.
Добрый день, Олег Владимирович, Спасибо за вопросы!
1) При использовании других соотношений растворителей метанола с водой, в том числе 1:1, исследуемый нами аналит не удерживался на неподвижной фазе. Вторая причина: хроматографический пик в условиях 1:1 (метанол:вода) был несимметричный и с широким основанием, что связано с неподходящими условиями элюирования. Важной частью в процессе достижения эффективного хроматографического разделения соединения является взаимодействие аналита с неподвижной и подвижной фазами.
2) Нами выбрана длина волны 250 нм, так как при данной длине волны было зафиксировано максимальное поглощение исследуемого аналита, то есть максимальный отклик детектора (который выражается в площади самого пика). При длине волны 235 нм чувствительность детектора и селективность определения ниже.