Отработка параметров и условий способа подготовки образцов крови на содержание N-итрозаминов с применением твердофазной экстр
Вы здесь
Приведены результаты экспериментальных исследований по использованию современного метода пробоподготовки твердофазной экстракции (ТФЭ). В ходе исследований отработаны параметры и условия оптимальной схемы элюирования ТФЭ и дистилляции образцов крови с перегретым паром. Для дистилляции использовали образец объемом 5 см3 и высаливающий реагент (щелочь) объемом 10 г. Оптимальная схема элюирования включала: стадию кондиционирования (активация картриджа хлористым метиленом объемом 2 см3, этилацетатом 2 см3, вода 2 см3); стадию адсорбции – загрузка стандартного образца объемом 70 см3; промывка картриджа – удаление мешающих компонентов стандартного образца и сушка картриджа в течение 20 минут и последним этапом стало последовательное элюирование целевых аналитов с картриджа Supelco Superclean Coconut 6 мл хлористым метиленом объемом 3 см3. Полученные элюенты были проанализированы хромато-масс-спектрометрическим методом. Полнота извлечения нитрозаминов из стандартного образца, с использованием оптимальных схем дистилляции и элюирования, составила для НДМА – 98,5 %, для НДЭА – 100%.
Комментарии - 4
Уважаемые Ольга Андреевна и Татьяна Валентиновна, исследование биологических сред на содержание токсических химических соединений является актуальной и обсуждаемой задачей в мировой клинической и гигиенической практике. Вместе с тем, считаю целесообразным задать следующие вопросы:
1. В одном из отчетов ВОЗ, посвященных исследованию НДМА, указано, что в крови человека его нормальное содержание варьирует в диапазоне 0.03 - 1.5 нг/мл. Как соотносятся с этими цифрами полученные Вами данные?
2. При описании метода "введено-найдено" образец для исследований Вы называете "стандартным", данный термин применим для образцов, типы которых утверждены органами сертификации и метрологии. Исследовали ли Вы действительные стандартные образцы крови с аттестованными значениями содержания N-нитрозаминов? Сущетсвуют ли вообще такие стандарты?
Ольга Владимировна, спасибо за вопросы!
1) В данной статье мы показали результаты исследования по разработке метода нитрозаминов в крови. При сочетании пробоподготовки методом ТФЭ и хромато-масс-спектрометрии мы смогли достичь нижний предел определения 0,0003 мкг/мл, как и наши коллеги за рубежом.
2) В нашей статье шла речь о стандартных образцах ГСО, которые сертифицированы и метрологически аттестованы.
Уважаемая Ольга Андреевна! При разработке современных методов определения химических веществ в биологических средах существует тенденция к снижению объема биопробы, в особенности при работе с инвазивной средой. В разрабатываемой методике используется 5 мл крови на 1 определение. Рассматривали ли Вы методические подходы по снижению объема крови, пошедшего на анализ в условиях сохранения чувствительности методики? Как соотносится используемое Вами количества крови с разработками иностранных коллег?
Екатерина Олеговна, спасибо за вопрос! Объем крови для анализа нитрозаминов, мы уменьшить не можем: во-первых, концентрации нитрозаминов в крови очень низкие, во-вторых сложная пробоподготовка (которая включает дистиляцию нитрозаминов из образца крови, ТФЭ И хромато-масс-спектрометрический анализ), в процессе которой возможны потери целевого аналита, если взять меньший объем крови.Предлагаемая нами методика, позволила достичь определения нитрозаминов в крови на уровне 0,0003 мкг/мл, как и у наших коллег за рубежом.